In-vitro-Zytotoxizitätstest?

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Gefragt von: Gunner Bradtke
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In-vitro-Zelllebensfähigkeits- und Zytotoxizitätsassays mit kultivierten Zellen werden häufig für die Zytotoxizität verwendet Tests von Chemikalien und zum Drogenscreening . ... Derzeit werden diese Assays auch in der onkologischen Forschung verwendet, um sowohl die Toxizität von Verbindungen als auch die Wachstumshemmung von Tumorzellen während der Arzneimittelentwicklung zu bewerten.

Was ist ein zytotoxischer Assay?

Zytotoxizitätstests Messen Sie den Verlust einiger zellulärer oder interzellulärer Strukturen und/oder Funktionen, einschließlich letaler Zytotoxizität . Sie geben daher einen Hinweis auf das Potenzial, Zell- und Gewebeverletzungen zu verursachen, und wurden als solche von einigen Forschern verwendet, um Gewebeverletzungen, einschließlich Augenverletzungen, vorherzusagen.

Wie funktioniert der Zytotoxizitätstest?

Eine häufige Verwendung von Zellen in Kultur ist für einen allgemein verwendeten Zytotoxizitätsassay, dem Zellen ausgesetzt werden eine Testverbindung und nach einer gewissen Inkubationszeit wird ein Marker gemessen, um die Anzahl der vorhandenen lebensfähigen Zellen im Vergleich zu positiven (Toxin) und negativen (Vehikel) Kontrollbehandlungen widerzuspiegeln.

Wie misst man die Zytotoxizität?

Messung der Zytotoxizität von Zellen

Während es auf verschiedene Arten gemessen werden kann, wird die Zelllebensfähigkeit durch die Einsatz von Vitalfarbstoffen (Formazanfarbstoffe) , Protease-Biomarker oder die Messung des ATP-Gehalts sind einige der am häufigsten verwendeten Methoden zur Bestimmung der Zytotoxizität.

Was ist der Zweck der Durchführung eines Zytotoxizitätstests für einen Zellviabilitätstest?

Typischerweise stellen Zelllebensfähigkeitsassays bereit eine Anzeige der Zellgesundheit durch Messung der Stoffwechselaktivität, des ATP-Gehalts oder der Zellproliferation . Die Zelllebensfähigkeit kann auch unter Verwendung von Zelltoxizitätsassays bewertet werden, die eine Anzeige von Markern des Zelltods, wie z. B. einem Verlust der Membranintegrität, liefern.

Zytotoxizitätsassays (1) In-vitro-Studie und Zellkultur

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Was ist das Prinzip des MTT-Assays?

Der MTT-Assay ist ein kolorimetrischer Assay zur Messung der Zellstoffwechselaktivität. Es basiert auf die Fähigkeit von Nicotinamidadenindinukleotidphosphat (NADPH)-abhängigen zellulären Oxidoreduktaseenzymen, den Tetrazoliumfarbstoff MTT zu seinem unlöslichen Formazan zu reduzieren , die eine violette Farbe hat (Abb. 10.1).

Was ist ein Apoptose-Assay?

Ein Apoptose-Assay erkennt und quantifiziert die zellulären Ereignisse, die mit dem programmierten Zelltod verbunden sind , einschließlich Caspase-Aktivierung, Zelloberflächenexposition von Phosphatidylserin (PS) und DNA-Fragmentierung.

Was ist Zytotoxizitätsaktivität?

Zytotoxizität ist die Eigenschaft, für Zellen toxisch zu sein . Beispiele für Giftstoffe sind chemische Substanzen. Die Behandlung von Zellen mit einer zytotoxischen Verbindung kann zu einer Vielzahl von Zellschicksalen führen. Die Zellen können einer Nekrose unterliegen, bei der sie die Membranintegrität verlieren und infolge der Zelllyse schnell absterben.

Was ist ein Zellzytotoxizitätstest?

Abstrakt. Der Zytotoxizitätstest ist einer der biologischen Bewertungs- und Screening-Tests, bei denen Gewebezellen in vitro verwendet werden, um das Zellwachstum, die Reproduktion und die morphologischen Auswirkungen von Medizinprodukten zu beobachten .

Was ist ein Zytotoxizitätstest?

Zytotoxizitätstests werden in Betracht gezogen Screening-Assays , verwendet, um die Reaktion der lebenden Zelle auf das Implantat in einem Zellkulturassay zu bewerten, einschließlich der Zelllebensfähigkeit und der Fähigkeit zum Zellwachstum.

Was ist der Unterschied zwischen Zelllebensfähigkeit und Zytotoxizität?

Der RealTime-Glo MT Cell Viability Assay ist ein nicht-lytischer Assay, der die Zellviabilität im Laufe der Zeit basierend auf dem Reduktionspotential der Zelle kontinuierlich überwacht. Zytotoxizitätstests Parameter messen, die mit dem Verlust der Membranintegrität beim Zelltod verbunden sind .

Was ist der Unterschied zwischen Zytotoxizität und Toxizität?

Während Toxizität ein allgemeinerer Begriff dafür ist, wie schädlich eine Substanz für einen Organismus ist; Zytotoxizität ist der Begriff dafür, wie toxisch eine Substanz für Zellen ist. Eine zytotoxische Verbindung können Zellschäden oder Tod verursachen entweder durch Nekrose oder Apoptose.

Was verursacht Zytotoxizität?

Chemische Mittel können wirken, indem sie die Protein- oder Nukleinsäuresynthese in der Zelle behindern, indem sie die Membran in der Zelle schwächen oder indem sie zelluläre Energieerzeugungswege behindern. Übliche Beispiele für zytotoxische Mittel, die Zytotoxizität verursachen, sind T-Zellen, die Viren, Bakterien und Krebszellen abtöten .

Was meinst du mit Assay?

Ein Assay ist ein Verfahren zur Analyse eines Stoffes zur Bestimmung seiner Zusammensetzung oder Qualität . Der Begriff wird in der Bergbauindustrie häufig verwendet, um sich auf Tests von Erzen oder Mineralien zu beziehen. Der Begriff Assay wird auch in der Umwelt-, Chemie- und Pharmaindustrie verwendet.

Was ist ein Zellproliferationsassay?

Zellproliferationsassays erkennen typischerweise Änderungen in der Anzahl von Zellen in einer Teilung oder Änderungen in einer Zellpopulation . Zellproliferationsassays werden hauptsächlich in vier Verfahren unterteilt: Stoffwechselaktivitätsassays, Zellproliferationsmarkerassays, ATP-Konzentrationsassays und DNA-Syntheseassays.

Was ist direkte Zytotoxizität?

Direkte Zytotoxizität betrachtet die Schädigung von Zellen, die in Gegenwart des Objekts gewachsen sind, das sich ohne Barriere in demselben flüssigen Medium befindet . Es gibt auch den Extrakttest, bei dem dem Zellwachstumsmedium extrahierbare Substanzen aus dem Objekt zugesetzt werden.

Was ist ein Zytotoxizitätseffekt?

Meistens bezieht sich der Begriff 'zytotoxisch' auf die Wirkung, die ein Chemotherapeutikum auf Krebszellen hat . In diesem Sinne kann ein zytotoxisches Mittel von einem zytostatischen Mittel unterschieden werden. Ein Zytostatikum würde dagegen die Zellteilung und das Wachstum hemmen, aber nicht direkt zum Zelltod führen. 3

Was sind natürliche Killerzellen?

Eine Art Immunzelle, die Granula (kleine Partikel) mit Enzymen enthält, die Tumorzellen oder mit einem Virus infizierte Zellen abtöten können. Eine natürliche Killerzelle ist eine Art weißer Blutkörperchen . . . . Auch NK-Zelle und NK-LGL genannt.

Welches Medikament hat eine zytotoxische Wirkung?

Eine Reihe von zytotoxischen Anti-Krebs-Medikamenten, einschließlich Paclitaxel (Luo und Prestwich, 1999; Luo et al., 2000; Auzenne et al., 2007), Doxorubicin (Luo et al., 2002), Natriumbutyrat (Coradini et al., 1999; 2004a,b), Mitomycin c ( Akima et al., 1996) und Epirubicin (Akima et al., 1996) hatten erhöhte CD44-spezifische ...

Wie bestätigt man Apoptose?

Apoptose wird nachgewiesen durch Messung der Externalisierung von Phosphatidylserin auf der Plasmamembran unter Verwendung von fluoreszenzmarkiertem Annexin V . Zusätzlich kann die Durchflusszytometrie eingesetzt werden, um Veränderungen der Zellgröße zu bestimmen (Bortner und Cidlowski, 2001; Warnes et al. 2011).

Was ist der beste Apoptose-Assay?

Western-Blotting (wie PARP- oder Caspase-3-Spaltung), DNA-Fragmentierungsassay und FACS würden ebenfalls empfohlen, um zu wissen, was Sie tatsächlich beobachten. Sie können auch Real Time PCR für Ihre interessierenden Gene verwenden, um den zusätzlichen Weg der Apoptose zusätzlich zu den anti/pro-apoptotischen Genen zu finden.

Wie wird Apoptose nachgewiesen?

Ein gängiges Verfahren, mit dem der Zustand des Zellchromatins untersucht werden kann, ist der DNA-Leiter-Assay. Brüche im Chromatin führen zur Bildung von DNA-Fragmenten, die mit mehreren Methoden nachgewiesen werden können. Bei gelelektrophoretischem Nachweis die Leiterbildung der fragmentierten DNA kann verwendet werden, um Apoptose zu charakterisieren.

Wie wird der MTT-Assay berechnet?

Assay-Protokoll

Medien aus Zellkulturen verwerfen. ...
Fügen Sie 50 l serumfreies Medium und 50 l MTT-Lösung in jede Vertiefung hinzu.
Platte 3 Stunden bei 37°C inkubieren.
Fügen Sie nach der Inkubation 150 l MTT-Lösungsmittel in jede Vertiefung hinzu.
Platte in Folie einwickeln und 15 Minuten auf einem Orbitalschüttler schütteln. ...
Absorbanz bei OD = 590 nm ablesen.

Warum wird DMSO im MTT-Assay verwendet?

DMSO ist am Ende der Reaktion zugegeben, um die aus der Reaktion gebildeten Formazankristalle aufzulösen . ... DMSO wird erst nach der Inkubation mit MTT-Farbstoff hinzugefügt, nachdem Sie das Medium von den Zellen entfernt haben, um Formazan-Kristalle aufzulösen.

Was ist IC50 im MTT-Assay?

MTT-Assay: Der Zelltod wurde unter Verwendung eines Systems bewertet, das auf der Tetrazoliumverbindung MTT basiert. ... Verbindungskonzentrationen die eine 50 %ige Hemmung des Zellwachstums bewirken (IC50) wurden aus Kurven berechnet, die durch Auftragen des Zellüberlebens (%) gegen die Arzneimittelkonzentration (μM) erstellt wurden.